Gregorio Magno nació aproximadamente en el año 540 en Roma, hijo de Gordiano y Santa Silvia, heredero de la familia senatorial Anicii. Después de estudiar derecho y gramática, fue nombrado prefecto de la ciudad de Roma (praefectus urbi Romae), un cargo que marcó su debut en la vida pública.
Admirador de Benito de Nursia, del que fue su biógrafo, comprometió muchos de sus recursos para transformar sus propiedades en monasterios en Sicilia y Roma, así como para ayudar a los pobres. Después de abandonar el puesto de prefecto, decidió convertirse en monje, emprendiendo la vida cenobítica y pasando mucho tiempo leyendo la Biblia.
Vivió por un tiempo en el convento del Celio, pero pronto se vio obligado a abandonarlo, una vez ordenado diácono; de hecho, en torno al 579 fue enviado por el papa Pelagio II como apocrisiario (embajador o nuncio) a la corte de Constantinopla, con el fin de pedir apoyo para luchar contra los lombardos. Permaneciò en Constantinopla durante seis años, y aquí se ganò la estima de Maurizio I, el emperador ascendidido al trono en 582; hasta el punto de que fue elegido para bautizar a su hijo Teodosio.
De regreso en Roma en el año 586, vivió durante unos pocos años en el monasterio de Celio. El 7 de febrero de 590, muriò el Papa Pelagio II a causa de la peste, y Gregorio Magno fue llama al trono papal, ayudado por el apoyo del Senado y el clero romano. Él, sin embargo, trató de oponerse y resistir a la insistencia de la gente, pidiendo al emperador Mauricio no ratificar la elección a través de una carta que, sin embargo, fue interceptada y sustituida por una petición del pueblo para apoyo su nominación papal.
La situación permaneció estancada durante varios meses, y en agosto Gregorio invitó a los fieles a realizar penitencia, llegando a organizar una procesión a la basílica de Santa María la Mayor. Durante la procesión, tuvo una visión del arcángel San Miguel envainando su espada en la cima de la Mole Adriana (actual Castel Sant'Angelo), e interpretó este símbolo como una señal del cielo que anticipaba el final de la epidemia de peste que se había prolongado durante meses.
Poco después, a pesar de la reticencia de Gregorio, llegó de Constantinopla la la ratificación de la elección papal y, por lo tanto, el 3 de septiembre de 590 fue consagrado Papa Gregorio I.
Durante su pontificado, se reveló como un administrador enérgico, no sólo desde el punto de vista de los asuntos internos de la Iglesia, sino también con respecto a las cuestiones políticas y sociales. Demostró ser un hombre de acción, a pesar de su débil estado de salud, imponiendo la moralización de la curia romana.
En el frente político, intentó en varias ocasiones obtener la ayuda militar del imperio, para contrarrestar la devastación causada por los lombardos, que hacían escapar al clero. Debido a un ejército imperial ineficiente y mal pagado, el Papa Gregorio I se hizo cargo de organizar la defensa de Roma, pagando 5 mil libras de oro de su propio bolsillo al rey lombardo Agilulfo para inducirlo a levantar el estado de sitio, asegurando al mismo tiempo el pago de un considerable tributo cada año.
Así, el Papa de forma totalmente arbitraria sustituyó al Senado y a la autoridad civil de la ciudad, ahora desprovista de cualquier tipo de papel político, en la gestión de salvar al pueblo romano. Sin embargo, fue acusado de infidelidad por el emperador Mauricio, que desaprobó su comportamiento y lo acusó de haber intentado negociar con el enemigo de manera poco inteligente.
Mientras tanto, también se empeñó en regular las relaciones de la institución monástica con los obispos, garantizando una mayor autonomía jurídica de los monasterios, que de ninguna manera deberían sufrir la interferencia eclesiástica, y regulando las relaciones entre la la vida familiar y la elección monástica. Teniendo como punto de referencia esta visión de la misión de la Iglesia, trató de evangelizar no sólo a los visigodos de España, sino también a los lombardos y, de hecho, con estos a raíz de la paz el 598, estableció relaciones positivas.
El mismo esfuerzo misionero fue puesto en práctica, también con los británicos: en este caso, Gregorio envió a los monjes benedictinos con el fin de cristianizar a la población, y logró en poco tiempo la conversión de Bretaña.
Si bien las relaciones con los francos eran excelentes, no podía decirse lo mismo de las relaciones con el emperador Mauricio, más allá de la cuestión de los Lombardos. Entre las razones de la fricción entre los dos, estaba el decreto promulgado por el emperador que prohibía a los soldados privados y funcionarios públicos convertirse en monjes.
Después de haber promovido el canto litúrgico que se conocería como canto gregoriano, el Papa Gregorio I - recordado históricamente como Gregorio Magno - murió en Roma el 12 de marzo de 604: su cuerpo fue enterrado en la basílica de San Pedro.
La Iglesia católica lo venera como santo y doctor de la Iglesia. Las iglesias ortodoxas también lo veneran como santo. San Gregorio Magno se conoce como el patrono de los papas, los cantantes y los músicos.